DNA 指紋法實驗
1.
提取DNA
2.
獲取DNA片段
3.
把DNA片段分離
4.
製作DNA指紋
實際運作
1.
預備1X TAE緩衝液。
2.
預備凝膠(60 c.c. 1X TBE 緩衝液+08g 瓊脂糖粉未)
3.
加熱1分鐘，直至瓊脂糖粉末完全溶解。
4.
讓溶液冷卻至約60oC。
5.
用膠紙密封槽的兩端。
6.
把瓊脂糖溶液加至槽內。
7.
於其中一端置入一樣本梳。
8.
30分鐘後，把樣本梳和膠紙移除。
9.
把緩衝液倒至槽內，液面應稍高於凝膠面。
10. 把DNA樣本慢慢注入凹位內。
11. 每次抽取另一樣本前，必須用新鮮緩衝液清洗針筒數次。
12. 插入電源線，留意，負極端應位於凹位位置。
13. 開啟100V直流電，靜置約一段時間。
14. 用亞甲藍溶液作染劑處理。
15. 用水沖洗凝膠。
16. 觀察DNA指紋。
有關DNA指紋法實驗操作的問題
(建議答案在最後)
1.
緩衝液有甚麼用途?
2.
瓊脂有甚麼特性可讓DNA通過?
3.
為何開始時DNA樣本要放在近負極的位置?
4.
如使用較高的直流電，試估計有甚麼優點及缺點?
5.
完成後，為何要再使用染色劑處理?
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有關DNA指紋法實驗操作的問題
(建議答案)
1.
緩衝液有甚麼用途?
答: 穩定溶液內的pH值，因為DNA帶負電，不同的pH值對DNA的移動有影響。
2.
瓊脂有甚麼特性可讓DNA通過?
答: 瓊脂不帶電，不會影響DNA的移動。而且瓊脂內有許多小孔可容許不同大小的DNA片段穿透。
3.
為何開始時DNA樣本要放在近負極的位置?
答: DNA分子帶負電，因此放在近負極的位置，使DNA可移向另一端的正極，以便指不同大小的DNA片段分開。
4.
如使用較高的直流電，試估計有甚麼優點及缺點?
答: 較高的直流電可使DNA移動速度更快，更快完成實驗。但較高的直流電亦容易破壞瓊脂，使DNA片段無法有效沿直線向正極移動。
5.
完成後，為何要再使用染色劑處理?
答: DNA片段本身是無色的，不同大小的DNA片段分開後分子量太少，不容易看得清楚，因此需要再進行一次染色處理。
