DNA 指紋法實驗

 

DNA 指紋法實驗

 

1.      提取DNA

2.      獲取DNA片段

3.      把DNA片段分離

4.      製作DNA指紋

 https://m.youtube.com/watch?v=AkshUdAOMsk&feature=youtu.be

實際運作

1.      預備1X TAE緩衝液。

2.      預備凝膠(60 c.c. 1X TBE 緩衝液+08g 瓊脂糖粉未)

3.      加熱1分鐘，直至瓊脂糖粉末完全溶解。

4.      讓溶液冷卻至約60^oC。

5.      用膠紙密封槽的兩端。

6.      把瓊脂糖溶液加至槽內。

7.      於其中一端置入一樣本梳。

8.      30分鐘後，把樣本梳和膠紙移除。

9.      把緩衝液倒至槽內，液面應稍高於凝膠面。

10.  把DNA樣本慢慢注入凹位內。

11.  每次抽取另一樣本前，必須用新鮮緩衝液清洗針筒數次。

12.  插入電源線，留意，負極端應位於凹位位置。

13.  開啟100V直流電，靜置約一段時間。

14.  用亞甲藍溶液作染劑處理。

15.  用水沖洗凝膠。

16.  觀察DNA指紋。

 

有關DNA指紋法實驗操作的問題 (建議答案在最後)

1.      緩衝液有甚麼用途?

2.      瓊脂有甚麼特性可讓DNA通過?

3.      為何開始時DNA樣本要放在近負極的位置?

4.      如使用較高的直流電，試估計有甚麼優點及缺點?

5.      完成後，為何要再使用染色劑處理?

 

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有關DNA指紋法實驗操作的問題 (建議答案)

1.      緩衝液有甚麼用途?

答: 穩定溶液內的pH值，因為DNA帶負電，不同的pH值對DNA的移動有影響。

2.      瓊脂有甚麼特性可讓DNA通過?

答: 瓊脂不帶電，不會影響DNA的移動。而且瓊脂內有許多小孔可容許不同大小的DNA片段穿透。

3.      為何開始時DNA樣本要放在近負極的位置?

答: DNA分子帶負電，因此放在近負極的位置，使DNA可移向另一端的正極，以便指不同大小的DNA片段分開。

4.      如使用較高的直流電，試估計有甚麼優點及缺點?

答: 較高的直流電可使DNA移動速度更快，更快完成實驗。但較高的直流電亦容易破壞瓊脂，使DNA片段無法有效沿直線向正極移動。

5.      完成後，為何要再使用染色劑處理?

答: DNA片段本身是無色的，不同大小的DNA片段分開後分子量太少，不容易看得清楚，因此需要再進行一次染色處理。